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分子互作研究 MOLECULAR INTERACTION RESEARCH

回答“这两个分子之间是否存在直接互作”。分蛋白-蛋白和蛋白-DNA两条线,均遵循“点对点初筛→精确验证”逻辑。

技术路线图

蛋白-蛋白互作 蛋白-DNA互作 1 酵母双杂交 点对点筛选候选互作 2 Co-IP/Pull-down/BiFC 精确验证互作关系 1 酵母单杂交 点对点筛选候选互作 2 EMSA/DNA Pull-down/ChIP 精确验证结合关系 3 双荧光素酶验证 确认对转录活性的影响 建议:先用酵母杂交等高通量方法筛选候选范围,再用 Co-IP / EMSA 等方法逐一精确验证

研究步骤与对应科研服务

1

蛋白-蛋白互作初筛

通过酵母双杂交点对点验证,初步判断两个候选蛋白之间是否存在相互作用。

2

蛋白-蛋白互作精确验证

通过Co-IP、Pull-down或BiFC等正交实验方法,在细胞裂解液或活细胞内进一步精确验证互作关系。

3

蛋白-DNA互作初筛

通过酵母单杂交点对点验证,初步判断候选蛋白(如转录因子)是否与特定DNA顺式元件结合。

4

蛋白-DNA互作精确验证

通过EMSA凝胶迁移实验精确验证蛋白与DNA的体外结合关系,明确结合的特异性。

5

转录活性影响确认

通过双荧光素酶报告实验,确认该互作关系对下游基因转录活性的实际调控效果,完成从“结合”到“功能”的验证闭环。

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