回答“这两个分子之间是否存在直接互作”。分蛋白-蛋白和蛋白-DNA两条线,均遵循“点对点初筛→精确验证”逻辑。
通过酵母双杂交点对点验证,初步判断两个候选蛋白之间是否存在相互作用。
通过Co-IP、Pull-down或BiFC等正交实验方法,在细胞裂解液或活细胞内进一步精确验证互作关系。
通过酵母单杂交点对点验证,初步判断候选蛋白(如转录因子)是否与特定DNA顺式元件结合。
通过EMSA凝胶迁移实验精确验证蛋白与DNA的体外结合关系,明确结合的特异性。
通过双荧光素酶报告实验,确认该互作关系对下游基因转录活性的实际调控效果,完成从“结合”到“功能”的验证闭环。
提交课题背景,技术顾问将为你梳理最合适的实验路径与服务组合。