提供酵母双杂交点对点验证与文库筛选两类服务,用于研究蛋白-蛋白相互作用(PPI)。针对膜蛋白等特殊靶标,提供膜体系酵母双杂交,弥补经典核体系对膜蛋白适用性的不足。
酵母双杂交利用了转录因子DNA结合域(BD)和转录激活域(AD)可以拆分、并在两者物理靠近时重新组合发挥功能这一特性。将诱饵蛋白与BD融合、猎物蛋白与AD融合,分别转入酵母细胞:如果诱饵和猎物蛋白确实相互结合,BD和AD就会被拉近到一起,重新组装出有活性的转录因子,激活下游报告基因的表达,通过检测报告基因表达情况(如营养缺陷型标记物的生长、显色反应)间接判断两个蛋白是否存在相互作用。
点对点验证是已知两个具体蛋白,验证它们是否相互作用;文库筛选则是已知一个诱饵蛋白,用它去"钓"一个包含大量未知猎物蛋白的cDNA文库,寻找所有可能与诱饵蛋白结合的未知互作伙伴,是一种更具探索性的筛选方式。
经典酵母双杂交体系依赖诱饵-猎物复合物进入细胞核激活转录,但膜蛋白通常锚定在细胞膜上、难以正常进入细胞核,因此常规体系对膜蛋白互作检测的适用性有限,需要采用专门设计的膜体系酵母双杂交(如split-ubiquitin系统)来解决这一局限。
酵母双杂交是一种体外的、非生理性的间接检测系统,存在一定的假阳性(如自激活)和假阴性(如蛋白在酵母中无法正确折叠)可能性,建议阳性结果通过Co-IP等在哺乳动物细胞中的正交实验方法进一步验证。
酵母遗传背景清晰、培养操作简便快速、成本低,且报告基因系统(如营养缺陷型选择标记)非常成熟,是进行大规模蛋白互作筛选的高效模式系统,这也是它自诞生以来一直被广泛使用的重要原因。
有些诱饵蛋白本身就具有转录激活能力,即使不与任何猎物蛋白结合,也能自主激活报告基因表达,造成假阳性结果。方案设计阶段通常需要先检测诱饵蛋白是否存在自激活现象,必要时需要截短诱饵蛋白或调整实验体系来排除这一干扰。
当你手上有一个感兴趣的蛋白,但完全不知道它可能和哪些蛋白发生相互作用时,酵母双杂交文库筛选能帮你从头找到候选互作蛋白——回答“这个蛋白的‘朋友圈’里都有谁”。
经典酵母双杂交基于转录因子(如GAL4)DNA结合结构域(BD)与激活结构域(AD)可分离重组的特性。将诱饵蛋白与BD融合、猎物蛋白与AD融合,若两蛋白发生相互作用,则使BD与AD在空间上重新靠近,激活下游报告基因(如HIS3、LacZ)表达,通过营养缺陷型筛选或显色反应判断互作。
互作蛋白鉴定、互作结构域定位、信号通路上下游关系研究等。
膜蛋白等特殊靶标也可覆盖
文库筛选按规模评估
序列测定+验证报告交付
点对点验证/文库筛选任选
提交实验方案与目标
技术顾问确认工艺与周期
支付不低于50%项目启动款,正式排产
全流程质控留档
结清尾款,完成验收
标准订单及定制/大额订单均需支付不低于合同总额的50%作为项目启动款,剩余尾款支付时限根据具体项目另行约定。
客户收到产品或报告后,请于1个月内完成验收;如对交付结果有异议,请于此窗口期内提出,我们将在2个工作日内响应并协助处理。