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重组蛋白
原核/真核多表达系统定制

提供大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞(HEK293/CHO)、昆虫-杆状病毒等多种表达系统的重组蛋白定制服务,涵盖表达载体构建、小试表达优化、大规模发酵/培养、纯化与质检全流程。

大肠杆菌、酵母、哺乳动物细胞,怎么选表达系统

核心原理
注意事项
小知识点

翻译后修饰能力,本质上取决于细胞有没有内质网-高尔基体系统

糖基化、二硫键正确配对等复杂翻译后修饰,依赖内质网中的糖基转移酶、蛋白二硫键异构酶等一整套加工机器,以及高尔基体对糖链的进一步修饰。大肠杆菌是原核生物,根本不具备这套细胞器系统,所以无论表达量多高,都无法完成这些修饰;酵母虽然是真核生物、具备基本的分泌途径,但糖基化模式(高甘露糖型)跟哺乳动物细胞的糖链结构存在天然差异;只有哺乳动物细胞的修饰系统才最接近人源蛋白的天然状态。

包涵体是表达速度和折叠速度不匹配的结果

大肠杆菌表达系统里,强启动子驱动的蛋白合成速度往往远超蛋白正确折叠所需的时间,加上原核细胞缺乏真核细胞丰富的分子伴侣蛋白,新生肽链之间容易通过疏水作用相互缠绕聚集,形成没有正常三维结构的不溶性包涵体——这也是为什么复杂的真核蛋白直接放进大肠杆菌高表达,很多时候拿到的是不溶性的沉淀而不是有活性的可溶蛋白。

不同表达系统的选择权衡

表达系统优势局限
大肠杆菌成本低、周期短、产量高缺乏真核翻译后修饰能力,复杂蛋白易形成不溶性包涵体
酵母成本相对较低,具备一定翻译后修饰能力糖基化模式与哺乳动物细胞有差异
哺乳动物细胞(HEK293/CHO)翻译后修饰最接近天然人源蛋白成本高、周期长
昆虫-杆状病毒兼顾较高产量与一定的真核修饰能力糖基化模式仍与哺乳动物不完全一致

蛋白复杂度决定了表达系统的下限

如果目的蛋白结构简单、不需要糖基化等复杂翻译后修饰,大肠杆菌系统通常是成本和效率的最优解;如果蛋白需要正确的二硫键形成、糖基化修饰才能保持天然构象和功能活性(如很多分泌蛋白、膜蛋白、抗体类蛋白),则往往必须选择哺乳动物细胞表达系统,即使成本和周期代价更高。

为什么大肠杆菌表达的蛋白经常会形成包涵体?

大肠杆菌缺乏真核细胞的分子伴侣和翻译后修饰系统,当重组蛋白表达速度过快、或蛋白本身结构复杂难以正确折叠时,容易在菌体内错误折叠并聚集形成不溶性的包涵体,这种情况通常需要通过降低诱导温度、优化诱导剂浓度,或后续变性-复性工艺来解决。

HEK293和CHO细胞表达系统有什么区别?

两者都是常用的哺乳动物细胞表达系统,HEK293细胞瞬时转染表达效率高、适合快速获得蛋白用于结构或功能研究;CHO细胞更适合建立稳定表达细胞株用于长期、大规模生产(如工业化抗体药物生产),糖基化修饰模式也存在细微差异,具体选择需结合应用场景。

实验目的与应用场景

实验目的

当你需要高纯度的目标蛋白用于抗体开发、结构研究或功能实验,且该蛋白可能需要复杂的翻译后修饰(如糖基化)时,选择合适的重组表达系统能确保获得有活性的功能蛋白——回答“怎么拿到一个真正‘能用’的蛋白”。

应用场景

技术原理与应用方向

技术原理

将目的基因克隆至含诱导型启动子的表达载体,转化/转染至宿主细胞,经诱导表达出目的蛋白;再利用标签亲和层析(如Ni-NTA)结合离子交换、分子筛等多步纯化获得高纯度蛋白。真核系统适合需要糖基化等翻译后修饰的复杂蛋白。

应用方向

抗原制备、酶活研究、结构解析、互作研究、抗体药物开发等。

服务优势

多表达系统可选

原核/酵母/哺乳动物/昆虫细胞任选

常规6-10周

按蛋白难度评估具体周期

多种标签可选

His/GST/Fc等带标签或去标签均可

全流程质检

SDS-PAGE+浓度+纯度报告交付

交付说明

按蛋白难度评估一般6-10周
交付内容:蛋白样品及SDS-PAGE、浓度、纯度报告;目的蛋白特性建议提前与技术顾问沟通表达系统选择。

订购流程

1

需求沟通

提交实验方案与目标

2

方案确认

技术顾问确认工艺与周期

3

预付下单

支付不低于50%项目启动款,正式排产

4

生产质控

全流程质控留档

5

交付验收

结清尾款,完成验收

付款与验收说明

项目启动款说明

标准订单及定制/大额订单均需支付不低于合同总额的50%作为项目启动款,剩余尾款支付时限根据具体项目另行约定。

验收说明

客户收到产品或报告后,请于1个月内完成验收;如对交付结果有异议,请于此窗口期内提出,我们将在2个工作日内响应并协助处理。

免责声明:本页面所示交付周期、技术参数为常规参考区间,具体以订单确认单为准。 ↑ 返回页面顶部
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