提供基于特异性修饰抗体的Western Blot/IP检测,以及基于质谱的翻译后修饰(PTM)鉴定服务,覆盖磷酸化、乙酰化、泛素化、甲基化等常见修饰类型。
磷酸化特异性抗体之所以只识别磷酸化状态的蛋白,是因为抗体的表位识别不仅包含了周围的氨基酸序列,还把磷酸基团本身的化学结构和电荷特征也纳入了识别范围——同一个位点磷酸化和未磷酸化两种状态,在抗体眼中是两个不同的抗原,这也是为什么修饰特异性抗体的质量高度依赖免疫原设计阶段是否使用了带有该修饰的合成肽段。
每一种翻译后修饰都会给蛋白带来特征性的、可精确计算的质量增量(例如磷酸化增加约80Da,乙酰化增加约42Da)。质谱通过测量肽段的精确质量,先判断是否存在这类质量偏移,再通过串联质谱把肽段进一步打碎,根据碎片离子的质量差定位到具体是哪个氨基酸残基发生了修饰——整个过程不依赖任何抗体,是从质量数据本身反推出修饰的存在和位置。
磷酸化等很多修饰在细胞裂解和样本处理过程中容易被磷酸酶等内源酶迅速去除,样本制备时通常需要加入磷酸酶抑制剂等保护剂,并全程保持低温操作,否则可能检测不到真实存在的修饰信号。
如果已经明确要检测某个已知位点的修饰状态、且存在商品化的高质量特异性抗体,抗体法(WB/IP)操作简便、成本较低;如果是探索性研究,想知道一个蛋白到底有哪些未知的修饰位点和类型,或者没有现成的特异性抗体可用,则需要依赖质谱法从头鉴定,但通常需要更多的起始样本量和更长的分析周期。
蛋白往往存在多个可能的修饰位点,不同位点的修饰可能受不同信号通路独立调控,使用针对不同具体位点的特异性抗体检测,结果自然可能不同,这也是为什么描述修饰状态时需要明确到具体的氨基酸位点,而不能笼统地说“磷酸化了”。
修饰后的肽段在质谱信号强度上通常远低于未修饰的肽段(修饰基团可能降低电离效率,且很多情况下真正被修饰的蛋白比例本身就不高),为了获得足够的信号强度进行可靠鉴定,通常需要比常规蛋白质组学分析更多的起始样本量或额外的修饰肽段富集步骤。
当你怀疑某个蛋白的功能变化不是因为表达量改变,而是因为磷酸化、乙酰化等修饰状态改变时,翻译后修饰检测能帮你确认这个“隐藏”的调控层面——回答“蛋白量没变,但它的‘状态’是不是变了”。
修饰特异性抗体可识别特定修饰位点或修饰类型,结合免疫沉淀富集后WB检测;质谱方法则通过富集修饰肽段后串联质谱鉴定修饰位点与修饰程度,可实现全蛋白组尺度的修饰谱分析。
信号通路激活状态研究、蛋白稳定性调控机制、药物作用机制研究等。
磷酸化/乙酰化/泛素化/甲基化
抗体法或质谱法可选
检测数据完整交付
质谱法可实现修饰谱深度分析
提交实验方案与目标
技术顾问确认工艺与周期
支付不低于50%项目启动款,正式排产
全流程质控留档
结清尾款,完成验收
标准订单及定制/大额订单均需支付不低于合同总额的50%作为项目启动款,剩余尾款支付时限根据具体项目另行约定。
客户收到产品或报告后,请于1个月内完成验收;如对交付结果有异议,请于此窗口期内提出,我们将在2个工作日内响应并协助处理。