基于CRISPR/Cas9等基因编辑技术,提供小鼠/大鼠等模式动物的基因敲除、条件性敲除、敲入、点突变等疾病模型定制构建服务,涵盖方案设计、胚胎操作、founder鉴定、繁育扩群全流程。
将设计好的sgRNA和Cas9蛋白(或对应mRNA/质粒)直接显微注射进受精卵原核期胚胎,Cas9在sgRNA引导下切割目标基因组位点,细胞通过非同源末端连接(NHEJ)实现基因敲除,或在同源臂/供体模板存在时通过同源重组(HDR)实现精确的敲入/点突变,注射后的胚胎移植进假孕母鼠体内发育成模型动物。
对于全身敲除会导致胚胎致死或表型难以解读的基因,通常先构建loxP位点标记的条件性等位基因(floxed allele),再与组织特异性或诱导性Cre重组酶小鼠杂交,只在特定组织或特定时间窗口触发基因敲除,避免全身性表型的干扰。
显微注射得到的F0代小鼠往往不是每个细胞都携带相同的编辑结果(存在嵌合现象),需要通过基因分型筛选出真正携带目标编辑的个体,再经过至少一代与野生型回交/自交,才能获得遗传稳定、基因型均一的F1及后续世代。
sgRNA设计阶段会尽量避开已知的高相似度基因组区域,但仍建议对候选脱靶位点做靶向测序验证,尤其是后续要用于表型分析、发表数据的模型,脱靶验证是保证结果可信度的重要一步。
因为CRISPR编辑发生在受精卵已经开始卵裂之后的某个时间点,不同分裂产生的细胞谱系里编辑发生的时机和结果可能不完全一致,导致同一只F0小鼠体内不同细胞/组织携带的基因型并不完全相同,这也是为什么F0代通常不能直接用于表型研究,需要先繁育纯合稳定的后代。
当细胞水平的研究已经无法回答你的问题,需要在完整生物体层面验证基因功能或模拟疾病时,定制化的基因编辑动物模型是体内研究的基础工具——回答“这个基因在真实的生命体里,到底起什么作用”。
通过原核显微注射或电穿孔将Cas9/sgRNA及修饰模板导入受精卵,经胚胎移植获得founder鼠,通过基因分型(PCR+测序)鉴定编辑成功的个体,再经繁育获得稳定遗传的模型品系。
疾病机制研究、药物筛选评价、基因功能体内验证等。
敲除/条件性敲除/敲入/点突变均可
视模型复杂度而定
PCR+测序确认编辑成功个体
founder鉴定到稳定品系一站完成
提交实验方案与目标
技术顾问确认工艺与周期
支付不低于50%项目启动款,正式排产
全流程质控留档
结清尾款,完成验收
标准订单及定制/大额订单均需支付不低于合同总额的50%作为项目启动款,剩余尾款支付时限根据具体项目另行约定。
客户收到产品或报告后,请于1个月内完成验收;如对交付结果有异议,请于此窗口期内提出,我们将在2个工作日内响应并协助处理。