提供酵母单杂交点对点验证服务,用于研究蛋白(如转录因子)与特定DNA顺式元件之间的结合关系,是转录调控机制研究中蛋白-DNA互作筛选的常用手段。
把候选DNA顺式元件插入到报告基因的上游调控区,把候选转录因子与转录激活域(AD)融合表达并导入同一个酵母细胞。如果这个转录因子确实能结合插入的DNA元件,就相当于把AD“拉”到了报告基因附近,激活下游报告基因(如营养缺陷型标记基因)的表达;如果不结合,AD就没有机会靠近报告基因,报告基因保持沉默。检测报告基因是否被激活,就间接反映了蛋白与这段DNA之间是否存在结合关系。
酵母双杂交研究的是蛋白-蛋白相互作用(用DNA结合域BD+转录激活域AD两半重组);酵母单杂交研究的是蛋白(通常是转录因子)与特定DNA顺式调控元件之间的结合关系(DNA元件本身替代了BD的位置),两者利用的是同一套“拆分重组转录因子”的基本框架,只是被检测的对象一个是蛋白,一个是DNA序列。
用作诱饵的DNA顺式元件序列,需要精确对应研究目的的调控区域(如启动子上的特定结合基序),序列设计错误或范围过大/过小都可能导致检测不到真实存在的结合关系,建议结合已知的转录因子结合基序数据库辅助设计。
常规酵母单杂交只能确认“这个转录因子能否结合这段DNA序列”这个整体关系,如果需要精确定位到具体的核心结合碱基,通常还需要结合EMSA、ChIP等实验方法或DNA元件的缺失突变系列做进一步精细定位。
酵母单杂交是在酵母这个异源体外系统中验证“理论上能否结合”;ChIP(染色质免疫共沉淀)则是在真实细胞的天然染色质环境下,检测转录因子在体内是否确实结合了目标区域,两者提供的证据层次不同,常常互为补充。
当你想知道“这段DNA序列到底能被哪些蛋白结合”,而不是反过来验证已知蛋白与已知DNA的关系时,酵母单杂交能帮你从蛋白文库中筛选出候选结合蛋白——回答“这段DNA序列,会被谁认出来”。
将候选DNA顺式元件(诱饵)克隆至报告基因(如HIS3、LacZ)上游构建报告载体,转化含猎物蛋白(如转录因子)表达质粒的酵母菌株;若猎物蛋白能与该DNA元件结合,会招募转录机器激活报告基因表达,通过营养缺陷型筛选或显色反应判断二者是否存在结合关系。
转录因子结合位点验证、启动子/增强子顺式元件功能研究、转录调控网络解析等。
针对转录因子-顺式元件结合验证
含载体构建、转化、筛选全流程
营养缺陷型筛选或显色反应确认
阳性结果可用EMSA/ChIP进一步确认
提交实验方案与目标
技术顾问确认工艺与周期
支付不低于50%项目启动款,正式排产
全流程质控留档
结清尾款,完成验收
标准订单及定制/大额订单均需支付不低于合同总额的50%作为项目启动款,剩余尾款支付时限根据具体项目另行约定。
客户收到产品或报告后,请于1个月内完成验收;如对交付结果有异议,请于此窗口期内提出,我们将在2个工作日内响应并协助处理。