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酵母单杂交
蛋白-DNA互作 · 点对点筛选

提供酵母单杂交点对点验证服务,用于研究蛋白(如转录因子)与特定DNA顺式元件之间的结合关系,是转录调控机制研究中蛋白-DNA互作筛选的常用手段。

怎么验证转录因子结合了哪段DNA

核心原理
注意事项
小知识点

核心原理:让DNA结合变成“可读出”的信号

把候选DNA顺式元件插入到报告基因的上游调控区,把候选转录因子与转录激活域(AD)融合表达并导入同一个酵母细胞。如果这个转录因子确实能结合插入的DNA元件,就相当于把AD“拉”到了报告基因附近,激活下游报告基因(如营养缺陷型标记基因)的表达;如果不结合,AD就没有机会靠近报告基因,报告基因保持沉默。检测报告基因是否被激活,就间接反映了蛋白与这段DNA之间是否存在结合关系。

和酵母双杂交的核心区别

酵母双杂交研究的是蛋白-蛋白相互作用(用DNA结合域BD+转录激活域AD两半重组);酵母单杂交研究的是蛋白(通常是转录因子)与特定DNA顺式调控元件之间的结合关系(DNA元件本身替代了BD的位置),两者利用的是同一套“拆分重组转录因子”的基本框架,只是被检测的对象一个是蛋白,一个是DNA序列。

DNA元件长度和序列准确性很关键

用作诱饵的DNA顺式元件序列,需要精确对应研究目的的调控区域(如启动子上的特定结合基序),序列设计错误或范围过大/过小都可能导致检测不到真实存在的结合关系,建议结合已知的转录因子结合基序数据库辅助设计。

酵母单杂交能确定转录因子结合DNA的具体碱基位点吗?

常规酵母单杂交只能确认“这个转录因子能否结合这段DNA序列”这个整体关系,如果需要精确定位到具体的核心结合碱基,通常还需要结合EMSA、ChIP等实验方法或DNA元件的缺失突变系列做进一步精细定位。

酵母单杂交和ChIP实验有什么区别?

酵母单杂交是在酵母这个异源体外系统中验证“理论上能否结合”;ChIP(染色质免疫共沉淀)则是在真实细胞的天然染色质环境下,检测转录因子在体内是否确实结合了目标区域,两者提供的证据层次不同,常常互为补充。

实验目的与应用场景

实验目的

当你想知道“这段DNA序列到底能被哪些蛋白结合”,而不是反过来验证已知蛋白与已知DNA的关系时,酵母单杂交能帮你从蛋白文库中筛选出候选结合蛋白——回答“这段DNA序列,会被谁认出来”。

应用场景

技术原理与应用方向

技术原理

将候选DNA顺式元件(诱饵)克隆至报告基因(如HIS3、LacZ)上游构建报告载体,转化含猎物蛋白(如转录因子)表达质粒的酵母菌株;若猎物蛋白能与该DNA元件结合,会招募转录机器激活报告基因表达,通过营养缺陷型筛选或显色反应判断二者是否存在结合关系。

应用方向

转录因子结合位点验证、启动子/增强子顺式元件功能研究、转录调控网络解析等。

服务优势

蛋白-DNA互作专用

针对转录因子-顺式元件结合验证

常规2-4周

含载体构建、转化、筛选全流程

报告基因显色判定

营养缺陷型筛选或显色反应确认

衔接下游验证

阳性结果可用EMSA/ChIP进一步确认

交付说明

酵母单杂交验证约2-4周
交付内容:阳性筛选结果与验证报告;建议结合EMSA或ChIP等实验进一步精确验证结合关系。

订购流程

1

需求沟通

提交实验方案与目标

2

方案确认

技术顾问确认工艺与周期

3

预付下单

支付不低于50%项目启动款,正式排产

4

生产质控

全流程质控留档

5

交付验收

结清尾款,完成验收

付款与验收说明

项目启动款说明

标准订单及定制/大额订单均需支付不低于合同总额的50%作为项目启动款,剩余尾款支付时限根据具体项目另行约定。

验收说明

客户收到产品或报告后,请于1个月内完成验收;如对交付结果有异议,请于此窗口期内提出,我们将在2个工作日内响应并协助处理。

免责声明:本页面所示交付周期、技术参数为常规参考区间,具体以订单确认单为准。 ↑ 返回页面顶部
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