覆盖一代(Sanger)、二代(NGS)、三代长读长测序平台,从单样本验证到高通量组学一站式服务,满足克隆验证到全基因组分析的不同需求。
反应体系中除了正常的dNTP,还混入了一定比例带荧光标记、但缺少3'羟基的双脱氧核苷酸(ddNTP)。DNA聚合酶延伸新链时,一旦随机掺入了ddNTP,这条链就无法继续延伸而终止——大量模板反应后,会生成长度各不相同、末端带荧光标记的片段集合。通过毛细管电泳按长度把这些片段依次分离,激光依次检测每个片段末端的荧光颜色,就能按顺序读出对应位置的碱基,这也是Sanger测序被称为“双脱氧终止法”的原因。
以Illumina平台为代表的二代测序,先把DNA打断成小片段,通过桥式扩增在芯片表面就地扩增出大量相同序列的分子簇;随后加入带可逆终止基团和荧光标记的核苷酸,每次只能延伸掺入一个碱基,拍照记录荧光信号确定这一轮加入的碱基类型,再化学切除终止基团和荧光基团,进入下一轮循环——如此重复上百次,实现海量片段的并行同步测序。
以纳米孔测序为代表的三代技术,让单链DNA分子直接穿过一个纳米级孔道蛋白,不同碱基通过孔道时会引起微弱但有特征差异的电流变化,实时记录并解析这些电流信号即可直接读出序列——由于不需要像一代二代那样依赖PCR扩增或荧光成像,能够读取远超二代测序的连续长片段,且理论上没有读长上限。
如果只是想确认“这个克隆的插入片段序列对不对”,一代测序(Sanger)准确度最高、性价比也最高;如果需要“全局性地看基因表达谱变化”,通常需要二代测序(如RNA-seq);如果需要“精确解析复杂结构变异或组装一个新基因组”,则更适合三代长读长测序。选错测序方式,很可能花了预算却拿不到能回答研究问题的数据。
Sanger测序的单碱基准确率是目前所有测序技术中最高的,虽然通量低、成本相对高,但正因为其高准确度,常被用作验证NGS等高通量测序结果的“金标准”参照方法。
读长短意味着长片段需要先打断成小片段测序,再通过生物信息学方法重新拼接/比对回原始序列,这个过程在遇到基因组中的重复序列区域时容易出现组装歧义,这也是三代长读长测序在解决这类问题上具备优势的原因。
当你需要确认“这段DNA序列到底是什么、有没有变异或错误”时,测序是获得最终、最直接答案的手段——回答“这段序列,究竟长什么样”。
用于质粒验证、克隆鉴定、SNP/SSR位点确认、MNP分型等,读长长、准确度高。基于双脱氧链终止法(ddNTP终止+毛细管电泳分离)。
适用于全基因组重测序、转录组(RNA-seq)、扩增子(16S/ITS)、外显子组等高通量测序需求。基于边合成边测序(SBS),大规模并行读取短片段。
适用于全长转录本、基因组de novo组装、结构变异检测、甲基化检测等,读长可达数十kb。基于单分子实时测序(SMRT)或纳米孔电信号。
克隆验证、群体遗传、基因表达谱、变异检测、微生物多样性、表观遗传等。
Sanger/NGS/三代长读长任选
NGS/三代按项目规模评估
fastq数据与生信分析报告交付
克隆验证到变异检测全覆盖
提交实验方案与目标
技术顾问确认工艺与周期
支付不低于50%项目启动款,正式排产
全流程质控留档
结清尾款,完成验收
标准订单及定制/大额订单均需支付不低于合同总额的50%作为项目启动款,剩余尾款支付时限根据具体项目另行约定。
客户收到产品或报告后,请于1个月内完成验收;如对交付结果有异议,请于此窗口期内提出,我们将在2个工作日内响应并协助处理。