提供双荧光素酶报告基因检测服务,广泛用于启动子/增强子活性分析、转录因子与顺式元件结合验证、miRNA与靶基因3'UTR靶向关系验证等。
实验中同时使用两种不同来源、催化不同底物的荧光素酶:萤火虫荧光素酶(Firefly)的表达受目标调控元件(如候选启动子、3'UTR)控制,是真正的检测对象;海肾荧光素酶(Renilla)由不受实验处理影响的组成型启动子驱动,持续稳定表达,作为内参用于归一化转染效率等实验误差。最终以Firefly/Renilla的比值作为衡量目标调控元件活性的定量指标,这种双内参设计大幅提升了实验的可靠性和重复性。
验证启动子/增强子活性时,通常将候选调控序列克隆到荧光素酶基因的上游;验证miRNA与靶基因3'UTR的靶向关系时,则是把靶基因3'UTR序列克隆到荧光素酶基因的下游,通过共转染miRNA mimic后观察荧光信号是否被显著抑制来判断靶向关系是否成立。构建方式需要根据具体研究问题确定,不能一概而论。
在靶基因3'UTR上的miRNA预测结合位点引入突变后,如果miRNA不再能显著抑制荧光素酶信号,说明之前观察到的抑制效应确实是通过这个特定结合位点介导的,而不是非特异性效应,这是miRNA靶向关系验证中常用的严谨对照设计。
在做好内参归一化(Firefly/Renilla比值)且实验条件规范的前提下,可以合理反映相对活性强弱,但这仍然是一种体外报告系统的间接测量,最终结论建议结合内源基因表达水平等其他证据共同验证,而不是仅依赖报告基因实验单一结果下定论。
当你想知道“这段启动子/UTR序列到底有没有转录调控活性”,或者“这个miRNA是否真的靶向这个基因”时,双荧光素酶实验是最直接的功能验证方式。
系统包含萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)与海肾荧光素酶(Renilla Luciferase)两个报告基因。将目标调控元件(如启动子、3'UTR)克隆至萤火虫荧光素酶上游,共转染以海肾荧光素酶作为内参。通过测定两者发光值的比值(Firefly/Renilla)校正转染效率差异,从而定量反映目标元件的转录调控活性。
启动子功能分析、转录因子靶基因验证、miRNA-靶基因验证、信号通路激活检测等。
萤火虫+海肾荧光素酶校正转染效率
含载体构建、转染、检测全流程
原始数据+统计分析+实验报告
启动子/转录因子/miRNA靶向均可
提交实验方案与目标
技术顾问确认工艺与周期
支付不低于50%项目启动款,正式排产
全流程质控留档
结清尾款,完成验收
标准订单及定制/大额订单均需支付不低于合同总额的50%作为项目启动款,剩余尾款支付时限根据具体项目另行约定。
客户收到产品或报告后,请于1个月内完成验收;如对交付结果有异议,请于此窗口期内提出,我们将在2个工作日内响应并协助处理。