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EMSA
凝胶迁移实验

检测蛋白与核酸(DNA/RNA)的体外结合,可通过竞争实验与超迁移(Supershift)实验验证结合的特异性。

为什么结合了蛋白的DNA跑得更慢

核心原理
注意事项
小知识点

核心原理:结合了蛋白的DNA跑得更慢

把标记好的DNA/RNA探针与候选结合蛋白在体外孵育后进行非变性凝胶电泳,游离的探针分子量小、迁移速度快;如果蛋白确实结合到了探针上,形成的蛋白-核酸复合物分子量更大,在凝胶中的迁移速度会明显变慢,呈现出条带位置“上移”(即出现Shift)的现象,通过对比有无目标蛋白孵育的条带位置差异,判断是否存在结合。

竞争实验与超迁移实验分别验证什么

竞争实验通过加入过量未标记的相同序列探针,如果条带迁移变化被削弱/消失,说明结合具有序列特异性;超迁移(Supershift)实验加入针对目标蛋白的特异性抗体,如果抗体也结合上了复合物,条带会进一步迁移得更慢,用于确认复合物中确实含有目标蛋白(而非其他非特异性结合蛋白)。

探针设计需要覆盖核心结合基序

探针序列需要准确覆盖预测的蛋白结合位点(如转录因子结合基序),过短或偏离核心区域都可能导致检测不到真实存在的结合关系,建议结合已知的结合基序数据库或前期生信预测结果设计探针范围。

EMSA和酵母单杂交都能验证蛋白-DNA结合,该怎么选?

EMSA是体外生化验证,能直接看到结合与否及大致的结合强度差异,操作相对快速;酵母单杂交是在酵母细胞体系内的间接验证,更适合大规模筛选未知的DNA结合蛋白。两者常常配合使用,酵母单杂交筛出候选蛋白后,用EMSA做进一步的生化验证。

为什么EMSA要用非变性电泳,而不是常规的SDS-PAGE?

SDS-PAGE会使蛋白变性并带上均一负电荷,破坏蛋白与核酸之间原本的天然结合状态;EMSA需要保留蛋白-核酸复合物的天然结合构象,因此必须使用非变性条件的电泳体系。

实验目的与应用场景

实验目的

当你想验证“这个转录因子是否真的能结合到这段DNA序列上”时,EMSA能在体外直接、直观地证明这种结合关系——回答“蛋白和DNA之间,到底有没有直接结合”。

应用场景

技术原理与应用方向

技术原理

核酸探针(同位素或生物素/荧光标记)与蛋白孵育后,结合了蛋白的核酸-蛋白复合物因分子量增大、电荷改变,在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中迁移速率减慢,形成滞后条带(shift);加入过量未标记竞争探针可使条带减弱,加入特异抗体可产生进一步滞后(supershift),从而确认结合的特异性。

应用方向

转录因子-DNA结合验证、RNA结合蛋白研究、结合位点鉴定等。

服务优势

特异性验证完整

竞争实验+Supershift双重验证

周期约3-4周

含探针制备、孵育、电泳全流程

电泳图完整交付

含实验报告与结果解读

多种标记方式

同位素/生物素/荧光标记可选

交付说明

EMSA检测约3-4周
交付内容:电泳图与实验报告;探针序列设计建议提前与技术顾问沟通确认。

订购流程

1

需求沟通

提交实验方案与目标

2

方案确认

技术顾问确认工艺与周期

3

预付下单

支付不低于50%项目启动款,正式排产

4

生产质控

全流程质控留档

5

交付验收

结清尾款,完成验收

付款与验收说明

项目启动款说明

标准订单及定制/大额订单均需支付不低于合同总额的50%作为项目启动款,剩余尾款支付时限根据具体项目另行约定。

验收说明

客户收到产品或报告后,请于1个月内完成验收;如对交付结果有异议,请于此窗口期内提出,我们将在2个工作日内响应并协助处理。

免责声明:本页面所示交付周期、技术参数为常规参考区间,具体以订单确认单为准。 ↑ 返回页面顶部
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