将候选互作蛋白分别与荧光蛋白N端/C端片段融合表达，若两蛋白发生互作使荧光蛋白片段重新折叠恢复荧光，从而在活细胞内直接可视化验证蛋白互作及其亚细胞定位。
将一个荧光蛋白（如YFP）从中间拆分成N端片段和C端片段，这两个片段单独存在时都没有荧光活性。分别将候选互作蛋白与这两个荧光蛋白片段融合表达，如果两个候选蛋白确实在细胞内发生相互作用、彼此靠近，就会带动两个荧光蛋白片段重新组装折叠、恢复出完整的荧光活性，从而通过荧光显微镜直接在活细胞中观察到互作发生的信号，还能同时获得互作发生的亚细胞定位信息。
一旦两个荧光蛋白片段成功重新折叠组装，这种结合状态相对稳定，即使后续两个蛋白的真实相互作用已经解除，荧光信号也可能持续存在一段时间，这意味着BiFC反映的更多是“曾经发生过结合”的累积信号，而非实时动态的结合/解离过程，解读结果时需要考虑这一特点。
荧光片段融合在候选蛋白的N端还是C端、以及融合本身是否会影响蛋白正常折叠和相互作用能力，都需要结合目标蛋白结构特点设计，必要时应设置阴性对照（如已知不发生相互作用的蛋白对）来评估背景荧光水平。
FRET(荧光共振能量转移)检测的是两个独立发光的荧光蛋白靠得足够近时的能量转移信号，理论上能反映相对实时的动态结合状态；BiFC依赖荧光片段的物理重组，信号一旦形成相对稳定持久，更适合检测“是否发生过结合”而非精细的动态过程，两种方法各有侧重的应用场景。
两个荧光片段即使在没有真实蛋白互作牵引的情况下，也存在一定概率因为高浓度过表达而发生自发的非特异性重组(尤其是在两个融合蛋白表达量很高时)，这也是为什么合理的阴性对照和适度的表达量控制在BiFC实验设计中非常重要。
当你已经通过Co-IP等方法初步确认两个蛋白存在互作，还想在活细胞内直接“看到”这个互作发生的位置和动态时，BiFC能提供可视化证据——回答“这两个蛋白的互作，在细胞里的哪个位置发生”。
荧光蛋白（如Venus/YFP）被拆分为无荧光活性的N端和C端两个片段，分别融合至候选互作蛋白；若两蛋白发生互作，两个荧光片段被拉近距离，重新折叠形成有功能的荧光蛋白发色团，产生可检测的荧光信号，从而直接反映互作发生的位置与强度。
活细胞内蛋白互作验证、互作动态与定位研究等。
无需裂解，保留生理状态
含载体构建、转染、成像全流程
含互作分析报告
互作验证与亚细胞定位一并呈现
提交实验方案与目标
技术顾问确认工艺与周期
支付不低于50%项目启动款，正式排产
全流程质控留档
结清尾款，完成验收
标准订单及定制/大额订单均需支付不低于合同总额的50%作为项目启动款，剩余尾款支付时限根据具体项目另行约定。
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