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腺病毒（Adenovirus）载体是以人腺病毒（最常见为血清型5，Ad5）为骨架改造的双链DNA病毒载体。它不整合宿主基因组，以附加体（episome）形式游离存在于细胞核内，能够在体内外实现快速、高效、大剂量的瞬时基因表达，是目前感染效率最高的病毒载体之一。
| 特性 | 说明 |
|---|---|
| 基因组类型 | 双链DNA，无包膜 |
| 宿主细胞范围 | 分裂与非分裂细胞均可高效感染 |
| 表达特点 | 不整合，游离表达，瞬时但高效 |
| 常规包装容量 | 第一代约7.5kb以内；辅助依赖型（gutless）可达约30kb |
| 免疫原性 | 较高，限制了重复给药的应用场景 |
野生型腺病毒具备完整的自我复制能力。作为基因递送载体使用时，第一代腺病毒载体通过删除E1区（病毒复制启动所必需）使其成为"复制缺陷型"——病毒无法在正常细胞中自我复制，只能在特殊的包装细胞系（如提供E1功能的HEK293细胞）中大量扩增制备。E3区（参与免疫逃逸功能，非复制必需）通常也一并删除，进一步腾出装载空间。
除第一代E1/E3缺失型外，还有一种"辅助依赖型"（Helper-Dependent，俗称gutless/第三代）腺病毒——几乎删除了全部病毒编码基因，只保留复制与包装所需的顺式作用元件，理论装载容量可达约36kb。这种设计需要辅助病毒提供反式作用的功能蛋白才能完成包装，工艺更复杂，但免疫原性更低、装载容量大幅提升，适合需要递送大片段（如全长抗肌萎缩蛋白基因）的特殊场景。
腺病毒衣壳蛋白（六邻体、五邻体、纤维蛋白）介导的细胞识别与内吞过程效率很高，加上单个病毒颗粒可以携带大量拷贝的病毒基因组同时递送，使得腺病毒能在短时间内让细胞获得远高于其他病毒系统的高拷贝目的基因表达，这也是它常被用于需要"快速、大量"表达场景（如疫苗研发中的抗原快速表达验证）的原因。
Wallace Rowe等人首次从人类腺样体（adenoid）组织培养物中分离出腺病毒，这也是"腺病毒"（Adenovirus）名称的由来——直译即"来自腺样体的病毒"。
随着分子生物学技术发展，研究者开始系统研究腺病毒基因组结构，为后续的载体化改造奠定基础。
第一代E1缺失型复制缺陷腺病毒载体被开发出来，并迅速因其高效的基因递送能力被用于基因治疗早期临床试验探索与基础研究。
辅助依赖型（gutless）腺病毒系统被开发，进一步降低免疫原性、提升装载容量；腺病毒载体也成为新冠疫苗等疫苗平台的重要技术路线之一。
人腺病毒有超过50种已知血清型，实验室最常用的是5型（Ad5）。不同血清型在人群中的既往免疫接触率、组织嗜性上有差异，选择合适的血清型有助于降低预存免疫对实验/治疗效果的干扰，具体方案可与技术顾问沟通确认。
腺病毒操作同样需在BSL-2条件下进行，由于其感染效率高、宿主范围广，操作时需格外注意气溶胶防护。
腺病毒衣壳蛋白免疫原性较强，容易被机体免疫系统识别并清除，这既限制了体内实验中的重复给药（机体产生中和抗体后再次给药效果会大打折扣），也是它主要用于"瞬时、单次"表达场景而非长期治疗场景的原因。
第一代腺病毒常规建议将目的基因控制在7.5kb以内；如确需递送更大片段（如全长抗体基因、大型报告基因组合），可考虑辅助依赖型系统，但需提前评估工艺复杂度与周期，建议与技术顾问充分沟通方案可行性。
腺病毒滴度常用两种单位表示：病毒颗粒数（VP/mL，物理颗粒总数）与感染性滴度（TCID50或PFU/mL，真正具备感染能力的颗粒数）。同一批病毒的VP数通常远高于感染性滴度，实验设计时需注意区分，避免因单位混淆导致实际感染剂量偏差。
腺病毒基因组以线状双链DNA的形式游离存在于细胞核内（附加体形式），细胞自身的转录机器可以直接识别并大量转录病毒携带的基因，不需要整合这一步，因此起效快、表达量大，只是这种表达会随细胞分裂被逐渐稀释，属于瞬时表达。
部分腺病毒血清型确实是引起人类普通感冒、咽结膜热等呼吸道/眼部感染的病原体之一，这也是为什么很多人体内已经存在针对常见血清型（如Ad5）的免疫记忆——这也是选择血清型时需要考虑“预存免疫”的原因。
Gutless直译是“掏空内脏的”，因为这种辅助依赖型腺病毒几乎删除了全部病毒自身的编码基因（相当于把病毒“掏空”），只保留复制包装必需的顺式元件，因此得名，是科研圈对第三代腺病毒载体的俗称。
腺病毒感染效率高、能在短时间内诱导强烈的免疫反应（包括体液免疫和细胞免疫），且制备工艺成熟、成本相对可控，这些特点使其成为新冠疫苗等多种疫苗研发中被广泛采用的技术平台之一。